El cultivo en medio nutritivo bajo condiciones estériles, de plantas, semillas, embriones, órganos, explantos, tejidos, células y protoplastos de plantas superiores.

Esta técnica se está utilizando de forma extensa, tanto en laboratorios como en industrias, con diversas finalidades:

• Germinación de semillas.
• Multiplicación vegetativa.
• Obtención de plantas libres de virus.
• Producción de haploides.
• Estudios fisiológicos diversos.
• Obtención de híbridos.
• Obtención de metabolitos secundarios.

OBJETIVO

Mantener cultivos de lentejas de agua en medio artificial de composición conocida y en condiciones de esterilidad.

MATERIAL Y MÉTODOS.

El medio de cultivo utilizado ha sido el descrito por Stewart (1968). Para preparar el medio de cultivo partimos de soluciones stoc para cada uno de los macronutrientes así como de una solución de micronutrientes en medio ácido.

Una vez preparada la solución de cultivo, se ajustó el pH de esta a 6.0 con una solución de NaOH, se dispensó 100 cc en erlenmeyers de 250 cc, o bien 20 cc en tubos de ensayo, se taparon y se esterilizaron en la autoclave a 121° C durante 20 minutos.

RESULTADOS.

En el primer intento de esterilización tratamos las planta con hipoclorito durante cinco minutos. El resultado fue que a los pocos minutos de haber iniciado el cultivo las frondes comenzaron a mostrar un color blanquecino que fue progresando desde las puntas hacia la parte central. Consideramos que el tiempo utilizado había sido demasiado largo, y que el hipoclorito había resultado tóxico para la planta, por eso, realizamos un segundo intento de esterilización utilizando menos tiempo. Este segundo intento dio lugar a cultivos en los cuales a los cinco o seis días era evidente la existencia de crecimiento de algas. Mientras tanto, algunas de las lentejas de agua de los tubos de la primera esterilización mostraron indicios de recuperación. Poco a poco iban formando nuevas frondes verdes.

Los tubos procedentes de la primera esterilización, en los cuales no se observó presencia de contaminación y en los que las plantas habían comenzado a crecer, fueron utilizadas para iniciar cultivos estériles. Estas plantas fueron transferidas de forma aséptica, dentro de la cámara de flujo laminar, a erlenmeyers con medio nutritivo fresco.

A partir de ese primer cultivo, se subcultivé en medio completo fresco cada mes aproximadamente.

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